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如何利用細胞培養(yǎng)瓶進行細胞傳代操作?

發(fā)布日期: 2022-10-08
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  細胞傳代是指需要將分割成小的部分,重新接種到另外的培養(yǎng)容器內(nèi),再進行培養(yǎng)的過程。細胞培養(yǎng)瓶是細胞通過過程中的一種常見消耗品。那么這個具體步驟是什么?
  
  1、從培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)瓶,用酒精噴壺在瓶身表面噴灑75%的酒精進行消毒,然后轉(zhuǎn)移到超凈臺上。
  
  2、打開蓋子,輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,用巴氏吸管加入適量的PBS緩沖液清洗1-2次,然后丟棄PBS緩沖液。
 
  

細胞培養(yǎng)瓶
 

 

  3、用吸管加入1-2毫升胰蛋白酶,并以"十字"方式搖動,使胰蛋白酶充分接觸細胞。
  
  4、將裝有胰蛋白酶的細胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置的顯微鏡平臺上,在顯微鏡下觀察細胞的消化情況。當細胞變圓并大量脫落時,準備停止消化,用75%的酒精噴灑瓶子表面,然后轉(zhuǎn)移到超凈臺。
  
  5、用吸管(或巴氏吸管)加入等量的含血清培養(yǎng)基,終止消化。吸管充分吹氣,使細胞*脫落。
  
  6、將瓶中的混合液體轉(zhuǎn)移到離心管中,平衡并離心約5分鐘。
  
  7、離心后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉(zhuǎn)移到超凈臺上,打開蓋子,將上清液倒入廢液槽。
  
  8、加入適量的含血清的培養(yǎng)基,用吸管吸管輕輕吹打,使細胞懸浮。
  
  9、將細胞懸液分成2個(或更多)清潔消毒的培養(yǎng)瓶,加入適量的培養(yǎng)基,并加蓋。
  
  10、將分裝好的細胞培養(yǎng)瓶放在倒置的顯微鏡臺上,觀察細胞。細胞的數(shù)量應該得到保證。細胞太少會影響生長。
  
  11、在瓶子上做標記,注明通過時間、細胞類型、操作者和其他信息。放入培養(yǎng)箱前,再次用酒精噴灑瓶體表面,整理操作平臺,用75%酒精擦拭超凈臺面,清理廢液和垃圾。
  
  細胞培養(yǎng)瓶操作時注意穿戴消毒服、手套和口罩,全程注意無菌操作,避免細胞污染。
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